Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次显现人体内自身抗基底到显现1型号心血管疾病药理学症状的十分困难率在幼儿时期就有很好的叙述，多个人体内自身抗基底特征性的幼儿中所有70%在血液转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一%减低到84%。相对之下，占药理学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的肺癌选择性还没有人得到更好的科学研究。

更加多的人开始可用分期系统来定义1型号心血管疾病的十分困难：幼基底在显现多种人体内自身抗基底时带入第1下一阶段，显现体温异常时带入第2下一阶段，显现症状时带入第3下一阶段。一些多发人体内自身抗基底特征性的幼基底，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为肺癌的1型号心血管疾病。我们之前叙述了一三组在首次健康检查到多种人体内自身抗基底样本后有数10年无心血管疾病的想像中慢十分困难者，这三组病患者000人少，但特点非常明确。随后，我们发现人体内自身肝细胞特异性CD8+T细胞核底物底物在十分困难想像中快的病患者中所基本不实际上，但在近期肺癌和近十年实际上的心血管疾病病患者中所很容易健康检查到。这显然指出，与十分困难病患者相对，这些病患者神经性底物的调节增强。

早期科学研究指出，尽管调节性T细胞核底物(Treg)数量情况下，但心血管疾病病患者实际上一些系统瑕疵，其中所之外对IL-2的底物意志力降低。此外，心血管疾病病患者中所的物理现象CD4+T细胞核底物显然对调节更具抵抗性，乏善可陈为物理现象T细胞核底物的减缓西移动，连续性显现出的Treg和基底外显现出的游离Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞核底物中所IL-2底物西移动。本科学研究的目标是叙述了CD4+调节性T细胞核底物(Treg)在一小群想像中想像中快十分困难者中所的特点，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁此表确诊的病患者亲属中所健康检查1型号心血管疾病的危险因素。我们之前叙述了近十年想像中快十分困难者的特点，他们保持多重人体内自身抗基底特征性超过10年，但没有人显现心血管疾病的药理学症状，慢性或非外阴神经性。随后，10名在此之后保持无心血管疾病并愿意提供大量血液样本的想像中快十分困难者划入T和B细胞核底物系统分析。在以外的科学研究中所，8名慢十分困难者(SP三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的人体内自身抗基底特征性。所有的参与者都位处1型号心血管疾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗基底对某些肝细胞的特征性底物，然而，一名病患者已经位处2期有数6年，但没有人显现药理学症状，一名病患者被病因为心血管疾病，该成年人72岁，在采集科学实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该供基底透过了原则上评估。分离外周血单个核底物细胞核底物(PBMCs)，采用多参数流式细胞核底物术和T细胞核底物减缓试验评估供基底中所Treg的kHz、表型号和系统。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无统筹聚类分析，评估Treg表型号。

结果：与生活品质供基底相对，来自慢十分困难基底的遗忘CD4+T细胞核底物的统筹聚类标示出，激活的遗忘CD4+ TregkHz减低，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白质(GITR)解读减低有关。一名HbA1c下降的病患者与十分困难想像中快者和也就是说的比对三组相对，Treg谱有所相异。系统分析指出，与生活品质供基底相对，来自想像中快十分困难基底的Treg介导的CD4+物理现象T细胞核底物减缓明显受损。乏善可陈为对物理现象CD4+T细胞核底物CD25和CD134解读的减缓减低。

三幅1 深入的表型号分析标示出，CD4+Treg共通点号在慢十分困难配置文件中所减低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有供基底的活CD4+CD45RA -细胞核底物上。根据标明物解读鉴定出10个元簇:遗忘T细胞核底物_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核底物;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核底物;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个相异Treg标明降解的10个元簇的MST。每个端口推选一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口三组周围手绘。每个端口中所的碗三幅指出单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出全面性标明解读。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)降解三幅，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装有该线三幅(丰度> 0.05%)未确定为HD和SP三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核底物(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核底物(l)。红色橘色推选理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的系统结构号证实，TregkHz的减低是十分困难想像中快的红色。基准门控(a - f)和玉米分析(g-k)比起SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核底物上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，精心设计FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及供基底SP 606(红色)中所CD25+ cd127的kHz概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装有该线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度著色，箭头醒目的簇被辨认为SP和HD配置文件二者之间的相异。(j)装有该线三幅标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(%)。(k)直方三幅标示出每个簇的表型号(粉红色)和Treg标明一般来说解读与背景解读(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与生活品质献血者相对，十分困难想像中快者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T细胞核底物元簇(遗忘T细胞核底物_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核底物;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核底物;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)健康检查每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热三幅(sp606不之外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(黑色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR解读结合，标示出直方三幅(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有供基底之外，p< 0.05(粉红色)供基底SP 606和也就是说的HD不之外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从基准门控，从所有HD(黑色)、所有SP(粉红色)和SP 606(红色)结合，标示出直方三幅(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自想像中快十分困难的CD4+ treg细胞核底物控制物理现象CD4+T细胞核底物的意志力降低。SP三组用粉红色的该线和橘色指出，HD三组用黄色的该线和橘色指出，红色的该线/橘色指出供基底sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核底物透过分选。CD4+CD25−(应答者)被标明为CFSE, Treg按观察的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核底物，培养出来3天后透过流式细胞核底物术健康检查。(a-d)与CD4+应答者一般来说应的treg培养出来(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。可用特征性比对(激活的响应细胞核底物不含treg)计算出来减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

三幅5 物理现象CD4+T细胞核底物对想像中快十分困难的T细胞核底物酪氨酸的减缓更敏感。SP三组用粉红色的该线和橘色指出，HD三组用黄色的该线和橘色指出，红色的该线/橘色指出供基底sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核底物透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标明，treg按观察的%氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核底物，培养出来3天后透过流式细胞核底物术(CD25反染)和细胞核底物因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百份(b)。(c,d) CD25减缓百份(c)和CD134减缓百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们推断的结论是，来自想像中快十分困难叔父的酪氨酸遗忘CD4+Treg在GITR解读中所得到了延展和丰富，忽略了进一步科学研究Treg在1型号心血管疾病风险幼基底中所的异质性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28